Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MAG Double Nickaseプラスミド (h): sc-401604-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MAG Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MAGダブルニカースプラスミド（h）およびMAGダブルニカースプラスミド（h2）は、MAGを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MAG 抗体 (A-11): sc-166849
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MAG Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401604-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MAG Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401604-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ミエリン関連糖タンパク質（MAG）は、シアル酸結合性の免疫グロブリン様細胞表面タンパク質であり、髄鞘形成を行うグリア細胞に豊富に発現しています。MAGは軸索とグリアの接着を媒介し、ミエリンと軸索の相互作用を安定化させます。MAGは糖鎖リガンドと結合し、細胞骨格の構築、神経突起の伸長、ならびに神経系の発達および成体の恒常性維持における軸索の完全性の維持に影響するシグナル伝達に寄与します。ヒト細胞では、MAGに関連する過程は、ミエリン構造、軸索輸送、神経損傷応答を制御する経路と交差しています。MAGの発現やシグナル伝達の異常は、脱髄や神経変性の病態生理、ならびに軸索再生を制限する機構に関与すると示唆されており、神経生物学における機構解析の有用な標的となっています。
MAG ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。