MAG Plasmide Double Nickase (h): sc-401604-NIC

La glicoproteina associata alla mielina (MAG) è una proteina di superficie cellulare di tipo immunoglobulinico in grado di legare l’acido sialico, arricchita nelle cellule gliali mielinizzanti, dove media l’adesione assone–glia e stabilizza le interazioni tra mielina e assone. MAG interagisce con ligandi glicani e contribuisce a segnali che influenzano l’organizzazione del citoscheletro, l’estensione dei neuriti e il mantenimento dell’integrità assonale durante lo sviluppo del sistema nervoso e l’omeostasi nell’adulto. Nelle cellule umane, i processi associati a MAG si intersecano con vie che regolano la struttura della mielina, il trasporto assonale e la risposta alle lesioni neurali. Una disregolazione dell’espressione o della segnalazione di MAG è stata implicata nella fisiopatologia demielinizzante e neurodegenerativa e nei meccanismi che limitano la rigenerazione assonale, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici in neurobiologia.

MAG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.