LTBP-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404036-ACT

LTBP3 codifica la latent transforming growth factor beta binding protein 3 (LTBP-3), una glicoproteina della matrice extracellulare che si lega al complesso latente del TGF-β e contribuisce a controllarne il sequestro, l’immagazzinamento e l’attivazione spaziale nei tessuti. Regolando la biodisponibilità del TGF-β, LTBP-3 contribuisce alla segnalazione dipendente da SMAD e ai processi di rimodellamento della matrice extracellulare che influenzano adesione, migrazione e differenziazione cellulare, nonché l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di LTBP3 sono state associate a una deregolazione della segnalazione del TGF-β in contesti quali fibrosi, rimodellamento del tessuto connettivo e biologia del microambiente tumorale, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della segnalazione dipendente dalla matrice. I ricercatori analizzano comunemente LTBP-3 nelle vie che collegano l’organizzazione della ECM all’attivazione dei fattori di crescita e ai programmi trascrizionali a valle.

LTBP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LTBP3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LTBP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LTBP3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LTBP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LTBP-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LTBP3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LTBP-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LTBP-3 nelle cellule tumorali con espressione di LTBP3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.