LITAF Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425275-ACT

LITAF (lipopolysaccharide-induced TNF factor) del topo è un regolatore trascrizionale e una proteina adattatrice implicata nella segnalazione dell’immunità innata e nell’espressione di geni infiammatori. Partecipa a vie a valle della stimolazione dei recettori Toll-like, influenzando i programmi di TNF e di altre citochine e intersecandosi con il traffico endosomiale e con processi ubiquitina-dipendenti che modellano il turnover dei recettori. L’attività di LITAF è stata collegata alla regolazione delle risposte associate a NF-κB e al rimodellamento trascrizionale indotto dallo stress in macrofagi e in altri tipi cellulari rilevanti per il sistema immunitario. La deregolazione della segnalazione di LITAF è stata studiata in contesti di infiammazione cronica e di biologia delle infezioni, e le sue funzioni cellulari sono anche pertinenti a modelli di neuroinfiammazione e ai meccanismi della neuropatia periferica.

LITAF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Litaf senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LITAF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Litaf nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Litaf, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LITAF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Litaf nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LITAF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LITAF nelle cellule tumorali con espressione di Litaf silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.