LHPP Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429326-ACT

Il gene murino **Lhpp** codifica **LHPP**, una fosfatasi istidina-dipendente che idrolizza residui di fosfoistidina su substrati proteici, contribuendo alla regolazione della segnalazione mediata dalla fosfoistidina. Modulando il controllo, dipendente dalla fosforilazione, dell’attività enzimatica e del flusso metabolico, LHPP è collegata alla bioenergetica cellulare e a processi sensibili ai nutrienti. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di LHPP sono state associate a una disregolazione del controllo della crescita e a una riprogrammazione metabolica in contesti rilevanti per la malattia, rendendola un nodo utile per studiare l’accoppiamento tra segnalazione e metabolismo. **Lhpp** è quindi spesso analizzato in modelli che indagano la dinamica della fosforilazione, l’adattamento allo stress e le vie che influenzano proliferazione e differenziamento.

LHPP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Lhpp senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LHPP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Lhpp nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Lhpp, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LHPP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Lhpp nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LHPP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LHPP nelle cellule tumorali con espressione di Lhpp silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.