LARP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404097-ACT

La LARP1 umana (La ribonucleoprotein 1) è una proteina legante l’RNA che regola la stabilità degli mRNA e la traduzione, con effetti rilevanti sugli mRNA 5′TOP che codificano proteine ribosomiali e fattori di traduzione. Agisce all’interfaccia tra il rimodellamento degli mRNP e la biogenesi dei ribosomi, integrando segnali nutrizionali e di crescita tramite una segnalazione dipendente da mTORC1 per modulare la capacità di sintesi proteica. Modellando l’output traduzionale e i programmi di espressione genica adattativi allo stress, LARP1 contribuisce al controllo della crescita cellulare, della proliferazione e dell’omeostasi metabolica. Un’attività di LARP1 deregolata e reti mTOR–traduzione alterate sono state riportate in diversi contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico per lo studio del controllo della traduzione e della regolazione della crescita cellulare.

LARP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LARP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LARP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LARP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LARP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LARP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LARP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LARP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LARP1 nelle cellule tumorali con espressione di LARP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.