LAR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402674-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAR Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- LAR CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal LAR CRISPR Activation Plasmid (h) e dal LAR CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di PTPRF. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LAR Antibody (7): sc-135969
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAR Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-402674-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il PTPRF umano codifica la proteina correlata all’antigene comune dei leucociti (LAR), una fosfatasi tirosinica proteica di tipo recettoriale che modula la trasduzione del segnale defosforilando substrati chiave alla membrana plasmatica. LAR regola l’adesione e la migrazione cellulare attraverso il crosstalk con le vie delle integrine e delle adesioni focali, plasmando il rimodellamento del citoscheletro e la segnalazione a valle mediata da chinasi. Influenza inoltre le reti dei recettori tirosin-chinasici, inclusa la segnalazione del recettore dell’insulina, con effetti sulla crescita cellulare e sulle risposte metaboliche. Un’attività deregolata di PTPRF/LAR è stata associata ad alterazioni della segnalazione dipendente dall’adesione ed è stata studiata in contesti quali l’invasività delle cellule tumorali e fenotipi di sensibilità all’insulina rilevanti per le malattie metaboliche.
LAR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTPRF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
LAR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTPRF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LAR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTPRF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LAR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LAR nelle cellule tumorali con espressione di PTPRF silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.