L-Selectin/CD62L/SELL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401984-ACT

SELL codifica la L-selectina (CD62L), un recettore di adesione espresso sui leucociti che media l’ancoraggio iniziale e il rotolamento sull’endotelio vascolare tramite il legame a ligandi sialilati e fucosilati. Questa interazione coordina l’homing dei linfociti verso gli organi linfoidi secondari e regola il traffico leucocitario durante l’infiammazione, integrandosi con la segnalazione inside-out guidata dalle chemochine e con il rimodellamento del citoscheletro per supportare l’extravasazione. Il clivaggio (shedding) della L-selectina da parte di metalloproteasi modula ulteriormente la migrazione cellulare e gli stati di attivazione, collegando la dinamica di espressione di SELL alla sorveglianza immunitaria. Livelli o modalità di clivaggio di CD62L disregolati sono spesso studiati nel contesto della segnalazione infiammatoria, dell’autoimmunità e della biologia delle neoplasie ematologiche, in cui un traffico alterato influisce sull’infiltrazione tissutale.

L-Selectin/CD62L/SELL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

L-Selectin/CD62L/SELL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di L-Selectin/CD62L/SELL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da L-Selectin/CD62L/SELL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via L-Selectin/CD62L/SELL nelle cellule tumorali con espressione di SELL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.