KAI 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401317-ACT

CD82 (KAI1) è una glicoproteina di superficie cellulare appartenente alla famiglia delle tetraspanine, che organizza microdomini di membrana e modula la segnalazione interagendo con integrine, recettori della famiglia EGFR e altre tetraspanine. Regolando adesione, migrazione e dinamica del citoscheletro, KAI1 influenza processi quali il traffico delle cellule immunitarie, le interazioni con la matrice extracellulare e la comunicazione vescicolare. CD82 è stato ampiamente studiato nel contesto della biologia delle metastasi, dove un’espressione alterata correla con variazioni del potenziale invasivo e con fenotipi associati alla transizione epitelio-mesenchimale. La disregolazione delle reti di segnalazione dipendenti da CD82 è stata inoltre collegata alla progressione tumorale e al rimodellamento del microambiente infiammatorio in diversi modelli di malattia.

KAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD82 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD82 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD82, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KAI 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD82 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KAI 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KAI 1 nelle cellule tumorali con espressione di CD82 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.