JAK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400439-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- JAK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il JAK1 Double Nickase Plasmid (h) e il JAK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira JAK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: JAK1 Antibody (B-3): sc-376996
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
JAK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400439-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JAK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400439-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Janus chinasi 1 (JAK1) è una tirosin chinasi non recettoriale che collega i recettori delle citochine a programmi trascrizionali a valle, soprattutto tramite la via JAK–STAT. Nelle cellule umane, JAK1 è essenziale per la segnalazione mediata dagli interferoni di tipo I e di tipo II e da molte interleuchine, consentendo la fosforilazione delle proteine STAT e il coordinamento delle risposte immunitarie innate e adattative. L’attività di JAK1 interagisce anche con le vie di segnalazione MAPK e PI3K/AKT, influenzando proliferazione, differenziamento e apoptosi in modo dipendente dal contesto. Una segnalazione di JAK1 deregolata è stata implicata in fenotipi associati all’infiammazione, evasione immunitaria e segnalazione di crescita aberrante, rendendola un nodo comune per studi meccanicistici in immunologia e biologia del cancro.
JAK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus JAK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di JAK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di JAK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con JAK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.