Plasmide CRISPR d'Activation (m) Jagged1: sc-421197-ACT

Le gène murin *Jag1* code Jagged1, un ligand canonique membranaire des récepteurs NOTCH, qui contrôle la signalisation juxtacrine durant le développement embryonnaire et l’homéostasie des tissus adultes. L’interaction Jagged1–NOTCH régule l’activation protéolytique du récepteur ainsi que des programmes transcriptionnels en aval impliquant les facteurs HES/HEY, lesquels influencent la spécification du destin cellulaire, la formation de frontières et les décisions de différenciation dans de multiples lignages. Chez la souris, *Jag1* contribue au remodelage vasculaire, à la neurogenèse et aux interactions des cellules immunitaires, et sa dérégulation est largement utilisée pour modéliser une activité altérée de la voie Notch dans des anomalies du développement ainsi que dans des contextes de signalisation oncogénique ou fibrotique. Comme Jagged1 fonctionne à la surface cellulaire, il est également pertinent pour l’étude des dynamiques ligand–récepteur, de l’activation de Notch dépendante de l’endocytose et du contrôle des états progéniteurs médié par la niche.

Jagged1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Jag1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Jagged1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Jag1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Jag1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Jagged1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Jag1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Jagged1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Jagged1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Jag1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.