ISGF-3γ p48 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421156-ACT

Il fattore regolatore dell’interferone 9 (Irf9), noto anche come ISGF-3γ p48, codifica una componente del complesso interferon-stimulated gene factor 3 (ISGF3) in grado di legarsi al DNA, che coopera con STAT1 e STAT2 per trasdurre i segnali degli interferoni di tipo I e di tipo III. In seguito all’interazione con il recettore dell’interferone e all’attivazione di JAK/STAT, IRF9 contribuisce a dirigere ISGF3 verso gli elementi di risposta ai geni stimolati dall’interferone (ISRE), coordinando programmi trascrizionali coinvolti nella difesa antivirale, nella presentazione dell’antigene e nella regolazione dell’immunità innata. Nei modelli murini, l’attività di Irf9 influenza le reti di segnalazione delle citochine e il crosstalk tra le vie dell’interferone e programmi infiammatori più ampi. La trascrizione dipendente da IRF9, quando deregolata, è stata studiata in contesti di risposta immunitaria alterata, infiammazione cronica e interazioni ospite–patogeno rilevanti per i meccanismi delle malattie immuno-mediate.

ISGF-3γ p48 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Irf9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ISGF-3γ p48 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Irf9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Irf9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ISGF-3γ p48. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Irf9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ISGF-3γ p48 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ISGF-3γ p48 nelle cellule tumorali con espressione di Irf9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.