ISGF-3γ p48 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400958-ACT

IRF9 codifica ISGF-3γ p48, un componente essenziale di legame al DNA del complesso del fattore 3 stimolato dagli interferoni (ISGF3), che si associa a STAT1 e STAT2 per tradurre la segnalazione degli interferoni di tipo I in programmi trascrizionali. In seguito a stimolazione con IFN-α/β, ISGF3 si lega agli elementi di risposta stimolati dagli interferoni (ISRE) per indurre fattori di restrizione antivirale, i macchinari per la presentazione dell’antigene e modulatori dell’immunità innata, centrali per l’output della via JAK–STAT. L’attività di IRF9 modella le risposte cellulari all’infezione virale e agli stimoli infiammatori, e la disregolazione delle reti di geni stimolati dagli interferoni è implicata nello squilibrio immunitario e nella patologia guidata dagli interferoni. In quanto regolatore trascrizionale nodale, IRF9 è spesso studiato nelle interazioni ospite–patogeno, nel crosstalk della segnalazione citochinica e nel controllo trascrizionale dell’immunità innata.

ISGF-3γ p48 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IRF9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ISGF-3γ p48 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IRF9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IRF9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ISGF-3γ p48. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IRF9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ISGF-3γ p48 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ISGF-3γ p48 nelle cellule tumorali con espressione di IRF9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.