IRP-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401817-NIC

L’ACO1 umano codifica la proteina 1 regolatrice del ferro (IRP-1), una proteina citosolica bifunzionale che si interconverte tra un’aconitasi con cluster [4Fe–4S] e un regolatore del metabolismo del ferro legante l’RNA. In condizioni di limitata disponibilità di ferro o di stress ossidativo, l’IRP-1 si lega agli elementi responsivi al ferro (IRE) negli mRNA bersaglio per controllare la traduzione e la stabilità di geni chiave della gestione del ferro, come ferritina, recettore della transferrina e ferroportina, collegando la biogenesi dei cluster ferro–zolfo alla regolazione genica post-trascrizionale. Questo switch si integra con l’omeostasi redox cellulare, il metabolismo mitocondriale e i programmi di adattamento all’ipossia modulando la disponibilità di ferro per la sintesi dell’eme e per gli enzimi Fe–S. La deregolazione del segnale IRP-1/IRE viene studiata in contesti di anemia e sovraccarico di ferro, neurodegenerazione, rimodellamento metabolico delle cellule tumorali e stress infiammatorio, in cui la gestione del ferro influenza il danno ossidativo e la capacità proliferativa.

IRP-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACO1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.