IRF-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400450-ACT

Il fattore regolatore dell’interferone 7 (IRF7/IRF-7) è un regolatore trascrizionale “master” delle risposte all’interferone di tipo I che amplifica l’immunità innata antivirale a valle dei recettori di riconoscimento di pattern. In seguito all’attivazione tramite vie quali TLR7/9–MyD88 e la segnalazione RIG-I/MAVS, IRF-7 promuove la trascrizione dei geni IFNA e di programmi di geni stimolati dall’interferone (ISG) che modellano la produzione di citochine, la presentazione dell’antigene e i circuiti di feedback infiammatori. Un’attività deregolata di IRF7 è stata implicata nelle firme interferoniche aberranti osservate in diversi fenotipi di suscettibilità virale e in condizioni infiammatorie immuno-mediate, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle interazioni ospite–patogeno e dell’omeostasi immunitaria. Nelle cellule umane, IRF-7 interagisce inoltre con la segnalazione NF-κB e JAK/STAT per coordinare risposte trascrizionali più ampie a acidi nucleici e stress cellulare.

IRF-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IRF7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IRF7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IRF7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IRF7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-7 nelle cellule tumorali con espressione di IRF7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.