IRF-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400551-ACT

IRF1 umano codifica il fattore regolatore dell’interferone 1 (IRF-1), un fattore di trascrizione legante il DNA che integra segnali di interferone e infiammatori per controllare la difesa antivirale, la presentazione dell’antigene e le decisioni sul destino cellulare. IRF-1 agisce a valle della segnalazione JAK/STAT e coopera con NF-κB e con altri membri della famiglia IRF per regolare la trascrizione dei geni stimolati dall’interferone, delle vie delle citochine e dei componenti del processamento dell’MHC di classe I. Attraverso la regolazione della sorveglianza immunitaria, dell’apoptosi e dei programmi di controllo della crescita, l’attività di IRF1 è spesso studiata nei contesti della biologia delle infezioni, delle interazioni tumore–sistema immunitario e degli stati infiammatori cronici. Una segnalazione di IRF-1 deregolata è stata associata ad alterazioni delle risposte immunitarie innate e adattative e a cambiamenti nella sensibilità cellulare allo stress e alla stimolazione da citochine.

IRF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IRF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IRF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IRF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IRF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IRF-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IRF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IRF-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IRF-1 nelle cellule tumorali con espressione di IRF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.