IRE1α Plasmide Double Nickase (h): sc-400576-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IRE1α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IRE1α Double Nickase Plasmid (h) e il IRE1α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IRE1α Antibody (B-12): sc-390960
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IRE1α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRE1α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERN1 codifica per l’enzima 1 alfa che richiede inositolo (IRE1α), una chinasi/endoribonucleasi transmembrana residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che funge da sensore principale delle proteine non correttamente ripiegate e da snodo centrale della risposta alle proteine non ripiegate (UPR). In condizioni di stress del RE, IRE1α oligomerizza e attiva lo splicing dell’mRNA di XBP1 mediato dalla sua RNasi e la degradazione regolata dipendente da IRE1 (RIDD), rimodellando i programmi trascrizionali e traduzionali che governano la proteostasi, la capacità secretoria, l’infiammazione e l’apoptosi. Attraverso il crosstalk con i segnali di PERK e ATF6 e l’attivazione a valle delle vie JNK e NF-κB, ERN1 influenza la segnalazione dell’immunità innata e l’adattamento metabolico. Un’attività IRE1α–XBP1 deregolata è implicata in condizioni caratterizzate da stress cronico del RE, inclusi i programmi di sopravvivenza delle cellule tumorali, la neurodegenerazione, il diabete e i disturbi infiammatori, rendendolo un bersaglio comune per studi meccanicistici.
IRE1α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.