Integrin β6/ITGB6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400999-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Integrin β6/ITGB6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Integrin β6/ITGB6 Double Nickase Plasmid (h) e il Integrin β6/ITGB6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ITGB6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Integrin β6/ITGB6 Antibody (C5): sc-517598
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Integrin β6/ITGB6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400999-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Integrin β6/ITGB6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400999-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITGB6 codifica la subunità β6 dell’integrina, che si associa all’integrina αv formando l’eterodimero αvβ6, ristretto agli epiteli e fondamentale per l’adesione cellula–MEC (matrice extracellulare) e la meccanotrasduzione. αvβ6 si lega a ligandi contenenti il motivo RGD, come fibronectina e vitronectina, e può attivare il TGF-β latente tramite interazione con il complesso LAP, collegando ITGB6 alla segnalazione TGF-β/SMAD, al rimodellamento epiteliale e al crosstalk immuno–stromale. Attraverso l’assemblaggio delle adesioni focali e vie a valle che includono FAK/SRC, MAPK e PI3K, ITGB6 influenza migrazione, invasione e programmi di riparazione delle ferite. Un’espressione deregolata di ITGB6 è stata associata a fibrosi, infiammazione cronica e a molteplici tumori epiteliali, nei quali viene spesso studiato come promotore di fenotipi invasivi e di segnalazione del microambiente.
Integrin β6/ITGB6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.