Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide Double Nickase (h): sc-401336-NIC

ITGA4 codifica per l’integrina α4 (CD49d), un recettore di adesione che si associa con β1 o β7 per formare gli eterodimeri α4β1 e α4β7, i quali regolano il traffico dei leucociti, l’adesione stabile e la migrazione transendoteliale. Legandosi a ligandi come VCAM1 e la fibronectina, l’integrina α4 coordina la segnalazione outside-in, in interfaccia con il rimodellamento del citoscheletro e con vie di sopravvivenza, incluse le segnalazioni delle adesioni focali, PI3K–AKT e MAPK. L’attività di ITGA4 contribuisce al posizionamento delle cellule immunitarie nei tessuti e influenza i microambienti infiammatori modulando le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. Un’adesione e migrazione dipendenti dall’integrina α4 deregolate sono state implicate in condizioni infiammatorie croniche e nella biologia delle neoplasie ematologiche, a supporto del suo impiego come nodo di ricerca per studi sulle interazioni tra sistema immunitario e stroma tumorale.

Integrin α4/ITGA4/CD49d Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.