Integrin α3/ITGA3/CD49c Double Nickase Plasmid (m): sc-421161-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Integrin α3/ITGA3/CD49c Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Integrin α3/ITGA3/CD49c Double-Nickase-Plasmid (m) und Integrin α3/ITGA3/CD49c Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Itga3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-374242
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Integrin α3/ITGA3/CD49c Double Nickase Plasmid (m) | sc-421161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Integrin α3/ITGA3/CD49c Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Itga3 kodiert das Integrin α3 (CD49c), das mit Integrin β1 zu einem lamininbindenden Rezeptor heterodimerisiert, der die Zell–Extrazellulärmatrix-Adhäsion und die Organisation der Basalmembran vermittelt. Die ITGA3-abhängige Signalübertragung reguliert die Dynamik fokaler Adhäsionen, den Zytoskelettumbau und die Polarität epithelialer Zellen über Signalwege wie FAK/Src, PI3K–AKT und MAPK und beeinflusst damit Migration, Proliferation und Überleben. In Mausgeweben trägt Integrin α3 zur epithelialen Integrität in Organen wie Haut, Lunge und Niere bei; seine Fehlregulation wird häufig im Zusammenhang mit veränderter Adhäsion, Entzündung und invasiven Phänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie und das Gewebe-Remodeling relevant sind.
Integrin α3/ITGA3/CD49c Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Itga3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Itga3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Itga3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Itga3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.