ING2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404193-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ING2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ING2 Double Nickase Plasmid (h) e il ING2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ING2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ING2 Antibody (B-5): sc-271544
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ING2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404193-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ING2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404193-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ING2 (inibitore della crescita, membro della famiglia 2) codifica una proteina oncosoppressore associata alla cromatina che funziona da lettore epigenetico tramite il suo dominio PHD finger, riconoscendo H3K4me3 e collegando i segni istonici agli esiti trascrizionali. ING2 partecipa alle risposte al danno del DNA e al controllo del ciclo cellulare modulando programmi dipendenti da p53 e cooperando con complessi di acetilazione/deacetilazione degli istoni che influenzano l’accessibilità della cromatina. Attraverso queste attività, ING2 incide su vie che regolano apoptosi, senescenza e stabilità del genoma. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ING2 sono state associate a un rimodellamento della cromatina deregolato e sono state riportate in molteplici contesti legati al cancro, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del controllo epigenetico.
ING2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ING2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ING2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ING2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ING2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.