IL-25 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404776-ACT

MYDGF codifica il “myeloid-derived growth factor”, una proteina secreta implicata nelle risposte allo stress cellulare e nell’omeostasi dei tessuti, mentre l’IL-25 (nota anche come IL-17E) è una citochina di origine epiteliale e immunitaria che promuove l’infiammazione di tipo 2. L’IL-25 segnala attraverso il complesso recettoriale contenente IL-17RB per attivare le vie di NF-κB e MAPK, inducendo l’espressione di IL-4, IL-5 e IL-13 e modulando l’immunità della barriera mucosale. Una disregolazione della segnalazione dell’IL-25 è stata associata a infiammazione allergica e a una polarizzazione immunitaria di tipo asmatico, ed è anche oggetto di studio nel contesto del rimodellamento epiteliale e del dialogo tra tumore e sistema immunitario. Queste vie vengono spesso investigate in modelli di vie aeree, intestino e cute per comprendere i cambiamenti, guidati dalle citochine, nella funzione delle cellule immunitarie innate e adattative.

IL-25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYDGF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-25 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYDGF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYDGF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-25. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYDGF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-25 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-25 nelle cellule tumorali con espressione di MYDGF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.