IL-18 Plasmide Double Nickase (m): sc-421094-NIC

Il18 nel topo codifica l’interleuchina-18 (IL-18), una citochina pro-infiammatoria prodotta principalmente da cellule mieloidi e dalle barriere epiteliali e attivata, tramite processamento da parte dell’asse inflammasoma-caspasi, nella sua forma matura secreta. IL-18 segnala attraverso il complesso recettoriale dell’IL-18, attivando vie dipendenti da MyD88 che inducono l’attivazione di NF-κB e delle MAPK, modulando la produzione di IFN-γ, la polarizzazione Th1 e le funzioni effettrici dei linfociti citotossici. Questo asse si intreccia con il riconoscimento immunitario innato e con la biologia degli inflammasomi, influenzando il reclutamento dei leucociti e le reti citochiniche nei tessuti infiammati. Un’attività di IL-18 deregolata è implicata in modelli murini di autoimmunità, infiammazione metabolica, infezioni e rimodellamento immunitario associato ai tumori, rendendo Il18 un bersaglio frequente negli studi di immunologia meccanicistica.

IL-18 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Il18 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Il18. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Il18. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Il18 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.