Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-10: sc-417060-ACT

L’IL10 humain code l’interleukine‑10 (IL‑10), une cytokine immunorégulatrice pléiotrope qui limite les réponses inflammatoires et favorise l’homéostasie tissulaire. L’IL‑10 transmet son signal via le complexe récepteur de l’IL‑10 afin d’activer des programmes transcriptionnels de STAT3 dépendants de JAK1/TYK2, réprimant largement la production de cytokines pro‑inflammatoires, la présentation d’antigènes et l’activation de l’immunité innée pilotée par NF‑κB, tout en soutenant des phénotypes immunitaires régulateurs. Cette voie est centrale pour l’équilibre entre défense de l’hôte et immunopathologie ; une expression altérée d’IL‑10 est associée à l’inflammation chronique, à l’auto‑immunité, à l’issue des maladies infectieuses et à l’immunosuppression liée aux tumeurs. L’IL‑10 est couramment étudiée dans les macrophages, les cellules dendritiques, les lymphocytes T et les compartiments épithéliaux afin d’analyser la communication entre cytokines, les mécanismes de tolérance et la résolution de l’inflammation.

IL-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.