IL-10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417060-ACT

L’IL10 umano codifica l’interleuchina-10 (IL-10), una citochina immunoregolatoria pleiotropica che limita le risposte infiammatorie e promuove l’omeostasi tissutale. L’IL-10 segnala attraverso il complesso recettoriale dell’IL-10 per attivare programmi trascrizionali di STAT3 dipendenti da JAK1/TYK2, sopprimendo in modo ampio la produzione di citochine pro-infiammatorie, la presentazione dell’antigene e l’attivazione dell’immunità innata mediata da NF-κB, sostenendo al contempo fenotipi immunitari regolatori. Questa via è fondamentale per bilanciare difesa dell’ospite e immunopatologia; un’alterata espressione di IL-10 è associata a infiammazione cronica, autoimmunità, esiti delle malattie infettive e soppressione immunitaria associata ai tumori. L’IL-10 è comunemente studiata in macrofagi, cellule dendritiche, linfociti T e compartimenti epiteliali per analizzare il dialogo tra citochine, i meccanismi di tolleranza e la risoluzione dell’infiammazione.

IL-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-10 nelle cellule tumorali con espressione di IL10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.