IGFBP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400915-NIC

IGFBP1 codifica la proteina 1 legante i fattori di crescita insulino-simili (insulin-like growth factor binding protein 1), un regolatore secreto che si lega a IGF-I e IGF-II per modularne la biodisponibilità, l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle attraverso le vie PI3K–AKT e MAPK. L’espressione di IGFBP1 è fortemente influenzata da segnali metabolici e ormonali, tra cui insulina, glucocorticoidi e stato nutrizionale, collegandola all’omeostasi del glucosio epatico e al bilancio energetico sistemico. Tamponando l’attività degli IGF, IGFBP1 può plasmare programmi di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento cellulare in contesti endocrini e paracrini. Livelli alterati di IGFBP1 sono stati associati a disregolazione metabolica e a cambiamenti nella segnalazione dell’asse IGF osservati in diversi stati fisiopatologici, sostenendone l’utilità come nodo meccanicistico negli studi sulla segnalazione dei fattori di crescita e sul metabolismo.

IGFBP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IGFBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IGFBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IGFBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IGFBP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.