IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400084-ACT

IGF1R codifica il recettore del fattore di crescita insulino-simile 1, una tirosin-chinasi recettoriale α/β unita da ponti disolfuro che lega i ligandi IGF per regolare crescita, sopravvivenza e differenziamento cellulari. Una volta attivato, IGF1R innesca le vie di segnalazione canoniche PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, influenzando la progressione del ciclo cellulare, la resistenza all’apoptosi e i programmi metabolici. Il crosstalk di IGF1R con la segnalazione del recettore dell’insulina e con l’adesione mediata dalle integrine contribuisce inoltre a modulare motilità e risposte allo stress in molti tessuti. Un’espressione o una segnalazione di IGF1R deregolate sono frequentemente oggetto di studio in contesti di trasformazione oncogena, fenotipi di resistenza alle terapie e disturbi metabolici o dello sviluppo.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IGF1R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IGF1R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IGF1R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IGF-1 Receptor α/β/IGF1R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IGF1R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IGF-1 Receptor α/β/IGF1R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IGF-1 Receptor α/β/IGF1R nelle cellule tumorali con espressione di IGF1R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.