IFI-44L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406752-ACT

IFI44L (interferon induced protein 44 like) codifica IFI-44L, un prodotto genico stimolato dall’interferone che viene rapidamente indotto a valle dell’interferone di tipo I e della segnalazione JAK/STAT durante le risposte antivirali innate. L’espressione di IFI-44L è comunemente utilizzata come readout molecolare dell’attivazione della via dell’interferone ed è collegata a programmi trascrizionali che modellano le risposte cellulari all’infezione virale e agli stimoli infiammatori. Un’espressione deregolata di IFI44L e la metilazione del suo promotore sono state riportate in diverse condizioni associate all’interferone, incluse firme di malattie autoimmuni sistemiche e stati di attivazione immunitaria legati alle infezioni. Queste proprietà rendono IFI44L un bersaglio utile per lo studio delle reti geniche guidate dall’interferone, dell’attivazione delle cellule immunitarie e della biologia della risposta ospite–patogeno.

IFI-44L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFI44L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFI-44L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFI44L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFI44L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFI-44L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFI44L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFI-44L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFI-44L nelle cellule tumorali con espressione di IFI44L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.