IDH3A Plasmide Double Nickase (h): sc-404788-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IDH3A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IDH3A Double Nickase Plasmid (h) e il IDH3A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IDH3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IDH3A Antibody (A-10): sc-398021
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IDH3A Plasmide Double Nickase (h) | sc-404788-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDH3A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404788-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IDH3A codifica la subunità alfa dell’isocitrato deidrogenasi 3 NAD-dipendente, un enzima chiave del ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) mitocondriale che catalizza la decarbossilazione ossidativa dell’isocitrato ad α-chetoglutarato con concomitante produzione di NADH. Accoppiando il flusso di carbonio all’attività della catena respiratoria, IDH3A contribuisce al metabolismo energetico cellulare, all’equilibrio redox e alla disponibilità di precursori biosintetici. Un’alterazione della funzione di IDH3A può perturbare il metabolismo mitocondriale ed è stata associata a disturbi che coinvolgono la fosforilazione ossidativa e l’elevata richiesta energetica dei tessuti, a supporto della sua rilevanza negli studi sullo stress metabolico, la segnalazione mitocondriale e il controllo della crescita.
IDH3A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDH3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDH3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDH3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDH3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.