HYAL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405005-ACT

HYAL2 umano codifica un’ialuronidasi ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che partecipa al rimodellamento della matrice extracellulare avviando la depolimerizzazione dell’ialuronano (HA) sulla superficie cellulare. Generando frammenti intermedi di HA che possono essere ulteriormente processati da altre ialuronidasi, HYAL2 influenza l’organizzazione della matrice pericellulare, l’adesione e la motilità cellulare, e può modulare la segnalazione mediata da recettori legata alla biologia dell’HA, come le vie associate a CD44 e RHAMM. Alterazioni del turnover dell’HA e dell’attività di HYAL2 sono state associate a cambiamenti dell’infiammazione e della fibrosi tissutale, nonché a fenotipi del microambiente tumorale, inclusi invasione e rimodellamento dello stroma. Di conseguenza, HYAL2 è spesso studiato in contesti in cui le dinamiche della matrice plasmano il comportamento cellulare, inclusi processi di sviluppo, risposte alle ferite e regolazione della matrice extracellulare associata al cancro.

HYAL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HYAL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HYAL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HYAL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HYAL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HYAL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HYAL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HYAL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HYAL2 nelle cellule tumorali con espressione di HYAL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.