HtrA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-410377-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HtrA4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HtrA4 Double Nickase Plasmid (h) e il HtrA4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HTRA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HtrA4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410377-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HtrA4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410377-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTRA4 codifica HtrA4, una serin-proteasi secreta della famiglia HtrA che contribuisce al controllo di qualità delle proteine extracellulari scindendo proteine mal ripiegate o danneggiate e modulando le interazioni cellula–matrice. Attraverso la proteolisi di specifici substrati, HtrA4 può influenzare la segnalazione responsiva allo stress, le cascate infiammatorie e i processi di rimodellamento che modellano l’omeostasi tissutale. Un’espressione alterata di HTRA4 è stata riportata in contesti che coinvolgono la biologia placentare e la funzione vascolare, e la disregolazione dell’attività delle proteasi extracellulari è rilevante per meccanismi di malattia legati a una proteostasi aberrante e al rimodellamento del microambiente. Queste caratteristiche rendono HtrA4 un bersaglio utile per studiare come le proteasi secrete regolino finemente la segnalazione e le dinamiche strutturali nei sistemi cellulari umani.
HtrA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTRA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTRA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTRA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTRA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.