Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HSPA5/BiP/GRP78 Plasmide Double Nickase (m): sc-420699-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HSPA5/BiP/GRP78 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (m) e il HSPA5/BiP/GRP78 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hspa5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HSPA5/BiP/GRP78 Antibody (76-E6): sc-13539
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HSPA5/BiP/GRP78 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420699-NIC | 20 µg | $410.00 |
Hspa5 codifica lo chaperone residente nel RE HSPA5/BiP/GRP78, un regolatore centrale del controllo qualità del ripiegamento proteico e della proteostasi nelle cellule di topo. HSPA5 lega polipeptidi nascenti o mal ripiegati e coordina la risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) attraverso interazioni che modulano i sensori di stress del RE, come PERK, IRE1 e ATF6. Influenzando la degradazione associata al RE (ERAD), l’omeostasi del Ca²⁺ e la capacità della via secretoria, contribuisce a determinare se le cellule si adattino allo stress o vadano incontro ad apoptosi. Un’attività deregolata di HSPA5 è spesso studiata in contesti di stress metabolico, neurodegenerazione e segnalazione oncogenica, in cui lo stress cronico del RE e un’alterata proteostasi contribuiscono a fenotipi rilevanti per la malattia.
HSPA5/BiP/GRP78 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hspa5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hspa5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hspa5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hspa5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.