HLA-G Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401226-ACT

HLA-G codifica una molecola MHC di classe I non classica che modula il riconoscimento immunitario legandosi a recettori inibitori come ILT2/LILRB1, ILT4/LILRB2 e KIR2DL4 su cellule NK, linfociti T e popolazioni mieloidi. La sua espressione favorisce la tolleranza immunitaria all’interfaccia materno-fetale e contribuisce alla regolazione della presentazione dell’antigene e della funzione effettrice citotossica all’interno della più ampia rete di checkpoint MHC di classe I/NK. HLA-G è spesso studiato in contesti di evasione immunitaria e di microambienti immunosoppressivi, inclusi l’oncologia e le condizioni di infiammazione cronica. Alterazioni dei livelli di HLA-G e dell’utilizzo delle sue isoforme sono state associate alla tolleranza al trapianto, all’autoimmunità e alla modulazione immunitaria mediata da patogeni, rendendolo un bersaglio utile per studi di immunologia meccanicistica.

HLA-G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HLA-G senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HLA-G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HLA-G nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HLA-G, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HLA-G. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HLA-G nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HLA-G nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HLA-G nelle cellule tumorali con espressione di HLA-G silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.