HLA-E Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-437133-LAC

Il gene murino H2-T-ps codifica la molecola MHC di classe I non classica HLA-E, una proteina conservata deputata alla presentazione dell’antigene che espone principalmente peptidi derivati dalla sequenza leader per regolare l’immunità innata e adattativa. HLA-E interagisce con recettori inibitori e attivatori sulle cellule NK e su specifiche sottopopolazioni di linfociti T, modulando la sorveglianza immunitaria, il “licensing” citotossico e la tolleranza nei tessuti. La sua espressione e il repertorio peptidico integrano segnali provenienti dalle vie di processamento dell’antigene e di assemblaggio dell’MHC di classe I, influenzando le interazioni alla sinapsi immunologica. La disregolazione della segnalazione mediata da HLA-E è stata studiata in contesti di evasione immunitaria virale, immunoediting tumorale, biologia dei trapianti e modelli di malattie infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale HLA-E (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di H2-T-ps in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HLA-E (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione H2-T-ps, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HLA-E. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo H2-T-ps e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.