Histone H1X Plasmide Double Nickase (h): sc-411232-NIC

H1FX codifica l’istone H1X, una variante di istone linker che si lega al DNA nucleosomico e contribuisce alla compattazione della cromatina di ordine superiore e all’organizzazione del genoma. Modulando la spaziatura dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina, H1X influenza la regolazione trascrizionale, la tempistica della replicazione del DNA e le risposte al danno al DNA all’interno di vie di controllo epigenetico. Un’abbondanza alterata o una ridistribuzione delle proteine della famiglia H1 può rimodellare stati della cromatina che incidono sui programmi di identità cellulare e sull’espressione genica adattativa allo stress. Di conseguenza, H1FX è spesso studiato nel contesto della disregolazione della cromatina rilevante per la biologia del cancro, i processi di sviluppo e i fenotipi legati alla stabilità del genoma.

Histone H1X Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus H1FX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di H1FX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di H1FX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con H1FX interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.