Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Histamine H3 Receptor Plasmide Double Nickase (h): sc-402473-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Histamine H3 Receptor Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Histamine H3 Receptor Double Nickase Plasmid (h) e il Histamine H3 Receptor Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HRH3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Histamine H3 Receptor Antibody (D-5): sc-390140
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Histamine H3 Receptor Plasmide Double Nickase (h) | sc-402473-NIC | 20 µg | $410.00 |
HRH3 codifica il recettore istaminergico H3, un GPCR accoppiato a Gi/o arricchito nel sistema nervoso centrale che funziona principalmente come autorecettore e eterorecettore presinaptico per regolare il rilascio di neurotrasmettitori. Dopo il legame dell’istamina, la segnalazione mediata da HRH3 inibisce l’adenilato ciclasi riducendo l’attività cAMP/PKA e modula la conduttanza dei canali ionici e le vie a valle MAPK/ERK, influenzando l’eccitabilità neuronale e la plasticità sinaptica. Attraverso il controllo del tono istaminergico e il cross-talk con i circuiti dopaminergici, colinergici e noradrenergici, HRH3 contribuisce alla regolazione sonno–veglia, alla cognizione e alla neurobiologia legata all’appetito. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di HRH3 sono state studiate nel contesto dei meccanismi di malattie neurologiche e neuropsichiatriche, a supporto della sua utilità come bersaglio per ricerche a livello di vie di segnalazione e circuiti.
Histamine H3 Receptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HRH3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HRH3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HRH3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HRH3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.