HIF PHD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402824-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIF PHD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIF PHD1 Double Nickase Plasmid (h) e il HIF PHD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EGLN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HIF PHD1 Antibody (2G3): sc-293220
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIF PHD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF PHD1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’EGLN2 umano codifica la prolil-idrossilasi 1 del fattore inducibile dall’ipossia (HIF PHD1), una diossigenasi Fe(II)/2-ossoglutarato–dipendente che idrossila le subunità HIF-α per favorire l’ubiquitinazione mediata da VHL e la degradazione proteasomiale in condizioni di normossia. Collegando la disponibilità di ossigeno ai programmi trascrizionali, PHD1 contribuisce a modulare le vie guidate da HIF che controllano il metabolismo cellulare, la segnalazione angiogenica, l’eritropoiesi e le risposte adattative allo stress. L’attività di EGLN2 interagisce con la funzione mitocondriale e l’equilibrio redox attraverso il metabolismo del 2-ossoglutarato, collegando il rilevamento dell’ossigeno a una più ampia regolazione metabolica. Una segnalazione EGLN2/PHD1 deregolata è stata implicata in contesti di risposte all’ipossia alterate e di rimodellamento metabolico osservati in diversi modelli rilevanti per la malattia, a supporto di studi meccanicistici sulla regolazione genica dipendente dall’ossigeno.
HIF PHD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EGLN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EGLN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EGLN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EGLN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.