Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HERG Double Nickase Plasmid (h): sc-401143-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HERG Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HERG Double-Nickase-Plasmid (h) und HERG Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNH2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HERG: sc-377388
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HERG Double Nickase Plasmid (h) | sc-401143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HERG Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNH2 kodiert den humanen, spannungsabhängigen Kaliumkanal HERG (Kv11.1), der den schnell verzögerten Gleichrichterstrom (IKr) leitet – einen zentralen Determinanten der Repolarisation des kardialen Aktionspotenzials und der QT-Intervall-Dauer. Die Aktivität des HERG-Kanals ist in Signalwege der Erregbarkeit und der Ionenhomöostase eingebunden, indem sie die Dynamik des Membranpotenzials und das Timing der Refraktärzeit mitprägt. Genetische oder funktionelle Störungen von KCNH2 sind mit angeborenen und erworbenen Long-QT-Phänotypen sowie einer erhöhten Anfälligkeit für ventrikuläre Arrhythmien assoziiert; zudem stellt der Kanal in elektrophysiologischen Untersuchungen und der Sicherheitspharmakologie häufig ein Off-Target-Risiko dar. Über Kardiomyozyten hinaus unterstützt die Expression von KCNH2 in erregbaren und proliferierenden Zellkontexten die Forschung zu Kanal-Trafficking, der Regulation des Gatings und der Wechselwirkung zwischen Membran- und Signaltransduktionsprozessen.
HERG Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNH2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNH2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNH2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNH2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.