HE4 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-426693-ACT

Il gene murino **Wfdc2** codifica **HE4**, una glicoproteina secreta contenente domini tipici delle whey acidic proteins, coinvolta nella regolazione delle proteasi extracellulari e nell’omeostasi delle cellule epiteliali. HE4 è associata al rimodellamento della matrice pericellulare e alla modulazione della segnalazione infiammatoria, processi che influenzano l’architettura tissutale, la funzione di barriera e la comunicazione cellula-cellula. Nei sistemi sperimentali, un’alterata espressione di HE4 è correlata a cambiamenti nei programmi di proliferazione, migrazione e differenziamento nei compartimenti epiteliali. Queste caratteristiche rendono **Wfdc2** un utile strumento molecolare per studiare la proteostasi sulla superficie cellulare e il crosstalk tra fattori secreti e risposte trascrizionali intracellulari.

HE4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Wfdc2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HE4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Wfdc2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Wfdc2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HE4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Wfdc2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HE4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HE4 nelle cellule tumorali con espressione di Wfdc2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.