HB-EGF Plasmide Double Nickase (h): sc-400795-NIC

Il gene umano **HBEGF** codifica per l’**heparin-binding EGF-like growth factor** (HB-EGF), un ligando ancorato alla membrana che può essere rilasciato per via proteolitica generando un fattore di crescita solubile. HB-EGF segnala principalmente attraverso i recettori della famiglia **EGFR/ERBB**, regolando l’attività delle vie **MAPK/ERK** e **PI3K–AKT** e influenzando proliferazione, sopravvivenza e migrazione cellulari, oltre al rimodellamento associato alla guarigione delle ferite. La sua espressione e lo shedding dell’ectodominio sono strettamente connessi alla segnalazione infiammatoria e responsiva allo stress, nonché all’attività proteasica mediata da **ADAM** sulla superficie cellulare. Un’alterazione della segnalazione **HBEGF/EGFR** è stata associata a risposte epiteliali e vascolari modificate in contesti quali fibrosi, biologia del cancro e rimodellamento cardiovascolare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dei programmi guidati dai fattori di crescita.

HB-EGF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HBEGF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HBEGF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HBEGF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HBEGF interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.