Plasmide CRISPR d'Activation (h) HB-EGF: sc-400795-ACT

HBEGF code le facteur de croissance de type EGF se liant à l’héparine (HB‑EGF), un ligand ancré à la membrane pouvant être clivé par protéolyse afin de générer une forme soluble se liant à EGFR et ERBB4. La signalisation de HB‑EGF active les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et des programmes transcriptionnels associés qui régulent la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que les interactions épithélio‑mésenchymateuses. Elle est impliquée dans la réparation tissulaire, le remodelage vasculaire et la signalisation inflammatoire via un dialogue moléculaire dépendant du contexte avec les métalloprotéases ADAM et les composants de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée de HBEGF et l’activation de l’axe EGFR sont fréquemment étudiées en biologie du cancer, dans la fibrose et en physiopathologie cardiovasculaire comme des mécanismes influençant les transitions d’état cellulaire et les réponses du microenvironnement.

HB-EGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HBEGF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HB-EGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HBEGF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HBEGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HB-EGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HBEGF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HB-EGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HB-EGF dans les cellules tumorales présentant une expression de HBEGF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.