Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HAS3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401531-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HAS3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HAS3 Double Nickase Plasmid (h) e il HAS3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HAS3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HAS3 Antibody (G-12): sc-365322
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HAS3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401531-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAS3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401531-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La ialuronano sintasi 3 (HAS3) è una glicosiltransferasi associata alla membrana che catalizza la sintesi dell’ialuronano, un importante glicosaminoglicano della matrice extracellulare. Regolando l’abbondanza di ialuronano pericellulare, HAS3 influenza l’adesione, la migrazione e la proliferazione cellulari, nonché la segnalazione infiammatoria, incluse le interazioni con CD44 e RHAMM che collegano il rimodellamento della matrice extracellulare alla dinamica del citoscheletro. L’attività di HAS3 contribuisce all’idratazione dei tessuti e alla funzione di barriera e può modulare la riparazione delle ferite e il crosstalk stroma–epitelio. Un’espressione alterata di HAS3 e il metabolismo dell’ialuronano sono stati associati a fibrosi, infiammazione cronica e rimodellamento del microambiente tumorale, a supporto del suo impiego come bersaglio in studi meccanicistici di fenotipi guidati dalla matrice extracellulare.
HAS3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HAS3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HAS3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HAS3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HAS3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.