Plasmide Double Nickase (h) HAS2: sc-401032-NIC

Le gène humain **HAS2** code l’hyaluronane synthase 2, une enzyme associée à la membrane qui polymérise l’UDP‑acide glucuronique et l’UDP‑N‑acétylglucosamine pour produire, à la membrane plasmique, de l’hyaluronane de haut poids moléculaire. Le dépôt d’hyaluronane induit par HAS2 façonne la matrice extracellulaire et le manteau péricellulaire, influençant l’hydratation, l’adhérence et la migration cellulaires via des interactions avec des récepteurs tels que CD44 et RHAMM. Son activité s’intègre à des voies qui contrôlent le remodelage tissulaire et la signalisation inflammatoire, et elle est régulée par des signaux de facteurs de croissance ainsi que par l’état métabolique cellulaire. Une expression dérégulée de HAS2 ou une accumulation d’hyaluronane est fréquemment étudiée dans les contextes de fibrose, d’inflammation chronique et de biologie du microenvironnement tumoral.

HAS2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HAS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HAS2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HAS2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HAS2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.