HADHA Plasmide Double Nickase (h): sc-402803-NIC

HADHA codifica la subunità alfa della proteina trifunzionale mitocondriale, un componente fondamentale della β‑ossidazione degli acidi grassi che catalizza le fasi di enoil‑CoA idratasi e 3‑idrossiacil‑CoA deidrogenasi necessarie al metabolismo degli acil‑CoA di acidi grassi a catena lunga. In accoppiamento con HADHB, HADHA sostiene l’omeostasi energetica durante il digiuno e in condizioni di elevata richiesta ossidativa, collegando il catabolismo lipidico alla funzione mitocondriale e all’equilibrio redox. L’alterazione di HADHA è associata a disturbi mitocondriali dell’ossidazione degli acidi grassi, tra cui la carenza di 3‑idrossiacil‑CoA deidrogenasi per catene lunghe e la carenza della proteina trifunzionale mitocondriale, che possono manifestarsi con cardiomiopatia, ipoglicemia ipochetotica e miopatia. HADHA è quindi ampiamente studiato nelle risposte allo stress metabolico, nella proteostasi mitocondriale e nella segnalazione guidata dai lipidi, rilevanti per la biologia neuromuscolare e cardiaca.

HADHA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HADHA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HADHA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HADHA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HADHA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.