G_{γ 10} CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420613-ACT

Gng10は、活性化されたGPCRを下流エフェクターへ結び付けるヘテロ三量体Gタンパク質の中核構成要素である、マウスGタンパク質γ10（Gγ10）サブユニットをコードします。特定のGαおよびGβサブユニットと組むことで、Gγ10は膜局在やシグナル出力の制御に関与し、アデニル酸シクラーゼ活性、ホスホリパーゼCシグナル、イオンチャネル調節、さらに下流のMAPKおよびPI3K関連応答に影響を与え得ます。これらの経路は、多くの組織において細胞間コミュニケーション、分泌、運動性、刺激依存的な転写プログラムを制御します。GPCR–Gタンパク質シグナルの動態変化は、神経機能、免疫シグナル、がんに伴うシグナル再配線の研究に広く関係するため、Gng10はマウスモデル系における経路摂動実験に有用です。

Gγ 10 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gng10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gγ 10 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gng10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGng10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gγ 10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGng10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGγ 10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGng10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGγ 10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。