G_{γ 10} Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420613-ACT

Gng10 codifica la subunità gamma 10 (Gγ10) della proteina G nel topo, un componente fondamentale delle proteine G eterotrimeriche che collegano i GPCR attivati agli effettori a valle. Associandosi a specifiche subunità Gα e Gβ, Gγ10 contribuisce a controllare la localizzazione a livello di membrana e l’output di segnalazione, influenzando l’attività dell’adenilato ciclasi, la segnalazione della fosfolipasi C, la modulazione dei canali ionici e le risposte a valle correlate a MAPK e PI3K. Queste vie regolano la comunicazione cellulare, la secrezione, la motilità e programmi trascrizionali dipendenti dallo stimolo in molti tessuti. Le alterazioni della dinamica di segnalazione GPCR–proteine G sono di ampia rilevanza per gli studi sulla funzione neurale, la segnalazione immunitaria e la riprogrammazione della segnalazione associata al cancro, rendendo Gng10 utile per esperimenti di perturbazione di pathway in sistemi modello murini.

Gγ 10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Gng10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gγ 10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Gng10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Gng10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gγ 10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Gng10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gγ 10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gγ 10 nelle cellule tumorali con espressione di Gng10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.