GSK3 beta Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-425249-LAC

Il gene murino Gsk3b codifica la glicogeno sintasi chinasi 3 beta (GSK3 beta), una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che integra segnali provenienti dalle vie PI3K–AKT, Wnt/β-catenina e mTOR per regolare il turnover proteico dipendente dalla fosforilazione e programmi trascrizionali. GSK3 beta controlla il metabolismo del glicogeno, la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la dinamica del citoscheletro, e modula la plasticità neuronale attraverso effetti sulle proteine associate ai microtubuli e sulla segnalazione sinaptica. Nella segnalazione canonica Wnt, GSK3 beta partecipa al complesso di degradazione che fosforila la β-catenina, collegando l’input del ligando a cambiamenti nell’espressione genica. Un’attività deregolata di Gsk3b è implicata in meccanismi rilevanti per disfunzioni metaboliche, infiammazione, segnalazione associata al cancro e neurodegenerazione, rendendolo un bersaglio comune per l’analisi delle vie di segnalazione in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale GSK3 beta (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Gsk3b in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GSK3 beta (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Gsk3b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GSK3 beta. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Gsk3b e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.