GRK 5 Plasmide Double Nickase (m): sc-420661-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRK 5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRK 5 Double Nickase Plasmid (m) e il GRK 5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Grk5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRK 5 Antibody (D-9): sc-518005
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRK 5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420661-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Grk5** codifica la chinasi dei recettori accoppiati a proteine G 5 (GRK5), una chinasi serina/treonina che fosforila i GPCR attivati per avviare il reclutamento di **β-arrestina**, la desensibilizzazione del recettore e la sua internalizzazione. Attraverso questo ruolo, GRK5 contribuisce a modulare l’ampiezza e la durata della segnalazione lungo vie a valle dei recettori adrenergici, muscarinici e delle chemochine, influenzando la dinamica dei secondi messaggeri e i programmi trascrizionali downstream. L’attività di GRK5 interseca anche processi regolatori più ampi, tra cui il traffico di membrana e la compartimentalizzazione del segnale, ed è stata collegata in letteratura alla segnalazione cardiovascolare, alle risposte infiammatorie e alla regolazione dei GPCR nei neuroni. Queste connessioni rendono **Grk5** un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di feedback dei GPCR e mappare il rimodellamento delle vie di segnalazione in condizioni di stress o in risposta a stimoli rilevanti per la malattia nei sistemi modello murini.
GRK 5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Grk5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Grk5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Grk5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Grk5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.