GRK 2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431016-NIC

Il gene murino **Grk2** codifica la chinasi dei recettori accoppiati a proteine G 2 (**GRK2**), una chinasi serina/treonina che fosforila i GPCR attivati per favorire il reclutamento di **β-arrestina**, la desensibilizzazione del recettore e il traffico endocitico. Oltre alla regolazione dei GPCR, GRK2 interagisce con nodi di segnalazione quali le vie **MAPK/ERK** e **PI3K/AKT** e può influenzare la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare tramite interazioni con proteine adattatrici. L’attività di GRK2 modula le risposte a catecolamine e chemochine, collegandola alla regolazione della segnalazione infiammatoria e delle vie responsivi allo stress. In letteratura, un’espressione o una segnalazione di GRK2 deregolate sono state associate ad alterazioni della segnalazione cardiovascolare e metabolica e a cambiamenti nella motilità delle cellule tumorali, a supporto del suo impiego come bersaglio meccanicistico in modelli di ricerca focalizzati su specifiche vie.

GRK 2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Grk2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Grk2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Grk2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Grk2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.