GPR120 Plasmide Double Nickase (h): sc-401362-NIC

FFAR4 codifica GPR120, un recettore accoppiato a proteine G sensibile agli acidi grassi a catena lunga, espresso in tipi cellulari metabolicamente attivi e in cellule immunitarie, dove funge da recettore nutrizionale collegando la disponibilità di lipidi alla segnalazione intracellulare. Una volta attivato, GPR120 coinvolge vie dipendenti dalle proteine G e da β-arrestina che modulano la dinamica dei secondi messaggeri, le cascate di chinasi e programmi trascrizionali implicati nella sensibilità all’insulina, nella differenziazione degli adipociti e nella segnalazione infiammatoria. Questi processi si intrecciano con una regolazione metabolica più ampia e con il crosstalk immunometabolico, rendendo FFAR4 un nodo frequentemente studiato nei meccanismi legati a obesità e diabete, nonché nei modelli di infiammazione cronica. Alterazioni della segnalazione di GPR120 sono state esaminate anche nel contesto della fisiologia gastrointestinale e dell’infiammazione associata ai tumori, a supporto della sua utilità come sonda di via in diversi sistemi cellulari.

GPR120 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FFAR4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FFAR4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FFAR4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FFAR4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.