GPI-PLD Plasmide Double Nickase (h): sc-404938-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPI-PLD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h) e il GPI-PLD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPLD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPI-PLD Antibody (D-10): sc-365096
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPI-PLD Plasmide Double Nickase (h) | sc-404938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPI-PLD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPLD1 codifica la fosfolipasi D1 specifica per glicosilfosfatidilinositolo (GPI-PLD), un enzima secreto che idrolizza le ancore GPI e regola il rilascio delle proteine ancorate a GPI dalle membrane cellulari verso compartimenti extracellulari. Modulando l’associazione alla membrana di diverse proteine ancorate a GPI, la GPI-PLD può influenzare la segnalazione cellula–cellula, i processi immunitari e il traffico tissutale di proteine legate a lipidi. L’espressione di GPLD1 e l’attività circolante della GPI-PLD sono state studiate nel contesto della biologia metabolica e infiammatoria, includendo associazioni con la resistenza all’insulina, vie correlate al fegato e la modulazione immunitaria sistemica. Queste connessioni funzionali rendono GPLD1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul turnover delle ancore GPI, sull’attività enzimatica extracellulare e sul rimodellamento del proteoma.
GPI-PLD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPLD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPLD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPLD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPLD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.