GPAM Plasmide Double Nickase (h): sc-403961-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPAM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPAM Double Nickase Plasmid (h) e il GPAM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPAM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GPAM Antibody (D-10): sc-398135
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPAM Plasmide Double Nickase (h) | sc-403961-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPAM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403961-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPAM (glicerolo-3-fosfato aciltransferasi, mitocondriale) codifica un’aciltransferasi chiave che catalizza il primo passaggio irreversibile della sintesi de novo dei glicerolipidi, convertendo il glicerolo-3-fosfato in acido lisofosfatidico. Controllando il flusso verso l’acido fosfatidico, i triacilgliceroli e le successive riserve di fosfolipidi, GPAM collega il metabolismo lipidico mitocondriale all’accumulo energetico cellulare, alla biogenesi delle membrane e alla segnalazione lipidica. L’attività di GPAM interseca l’equilibrio tra captazione degli acidi grassi e β-ossidazione, la formazione delle gocce lipidiche e le risposte allo stress metabolico. Un’espressione o attività deregolata di GPAM è stata associata ad alterazioni nella gestione dei lipidi a livello epatico e adiposo ed è spesso studiata nel contesto di insulino-resistenza, steatosi e fenotipi cardiometabolici più ampi.
GPAM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPAM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPAM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPAM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPAM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.