GOLGB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-432441-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GOLGB1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GOLGB1 Double Nickase Plasmid (m) e il GOLGB1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Golgb1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GOLGB1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-432441-NIC | 20 µg | $410.00 |
Golgb1 codifica la proteina di impalcatura della famiglia delle golgine GOLGB1 (giantin), una grande componente a coiled-coil della matrice del Golgi che contribuisce a mantenere l’architettura del nastro del Golgi e a organizzare l’ancoraggio delle vescicole. GOLGB1 interagisce con vie di traffico che supportano il trasporto dal RE al Golgi, la progressione del carico all’interno del Golgi e la maturazione, dipendente dalla glicosilazione, delle proteine secretorie e di membrana. Attraverso il suo ruolo nell’omeostasi del Golgi, Golgb1 influenza processi quali la deposizione della matrice extracellulare, l’espressione di recettori sulla superficie cellulare e la secrezione polarizzata, centrali per lo sviluppo e l’organizzazione dei tessuti. L’alterazione di proteine strutturali del Golgi, incluso giantin, è stata associata a difetti della ciliogenesi e della biologia del tessuto connettivo, rendendo Golgb1 un bersaglio utile per studiare meccanismi dipendenti dagli organelli rilevanti per fenotipi dello sviluppo.
GOLGB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Golgb1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Golgb1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Golgb1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Golgb1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.